抗体与抗原表位或抗原决定簇之间的结合力称为抗体亲和力 ，其本质是一种非共价作用力 ，包括对氨基酸之间的吸 引力 ，氢键 ，疏水性作用力等。抗体亲和力体现了一个抗体分子和一个半抗原分子或抗原分子的一个决定簇起反应的能力。
抗体亲和力的大小可以用亲和力常数 KD（单位为升/质量摩尔浓度）表示 ，其计算公式为 KD =[Ab ▪ H]/（[Ab][H]），其中[ ]表示摩尔浓度 ，Ab 表示抗体 ，H 表示半抗原 ，Ab— H 表示抗体与半抗原的结合物。亲和力常数 KD 越高 ，则抗体结合半抗原的能力越强。抗体亲和力的强弱取决于抗体对位（ Paratope)与所用抗原表位（ epitope)之间的配合程度 ，包括接触面积的大小、 吻合的密切程度、 以及带点基团与疏水基团的分布等。
抗体亲和力测定方法 |
▸生物膜干涉技术（ BLI ）：根据生物膜干涉技术（ BLI ），可利用 Fortebio Octet®检测仪器对抗体亲和力进行测定的原理为 ：生物传感器底端 由固定的相互作用分子组成的生物膜层覆盖 ，当具有一定带宽的可见光垂直入射生物膜层时 ，光在生物膜层的两个 界面反射后形成被光谱仪检测到的一定波长的干涉波。 固定分子与溶液中分子发生相互作用时 ，生物层厚度增加 ， 干涉光谱曲线向波长增加的方向移动 ，相位移动由工作站探测并分析 ，可定量得出传感器表面分子数量变化及相关浓度与动力学数据。 |
▸固相放射免疫法（ SP-RIA ）：固相放射免疫法可以比较准确的测出抗体亲和力常数 ，其操作步骤为 ：用抗原（如病毒颗粒或蛋白质）包被微板 ， 加入系列稀释的定量单克隆抗体。温育至反应平衡后 ，洗去未结合的单克隆抗体加放射性同位素标记的抗小鼠 lg第二抗体 ，温育后洗涤 ，将小孔割下计数结合的放射性强度。只要保持包被抗原量恒定 ，即可按公式（[Ab]a/[Ab]r -[Ab]B)/(Ab)a =-nK。其中[Ab]a 为结合抗体浓度 ，[Ab]r 为总抗体浓度 ，n 为抗体结合价 ，K 为亲和力常数。 |
▸结合抗原沉淀法：将单价抗原与相应抗体同在溶液中温育进行抗原-抗体反应。在反应达到平衡后 ，用 50%饱和硫氨酸或 15%聚乙二醇进行沉淀 ，将结合与游离抗原分离 ，分别测定浓度 ，继而按照上述公式计算出亲和力常数 K。 |
▸放射免疫法（ RIA ）：将系列稀释的定量单克隆抗体与痕量的放射标记抗原分子在溶液中一同温育（单克隆抗体必须大大过量） ，平衡后测定结合曲线。根据米-曼氏动力学原理 ，50%最大结合处单克隆抗体结合价浓度的倒数即为亲和常数 K。 |
▸酶联免疫吸附实验（ ELISA 法）：ELISA 的灵敏度很高 ，利用 ELISA 可以测出 10-8 M 数量级的亲和力常数 ，可以满足一般抗体亲和力的测定需要。且 ELISA 无需对抗原或抗体进行标记 ，操作简便易行 ，是目前常用的亲和力测定方法。其操作方法为 ：将抗体与定量 的抗原一同在溶液中温育 ，进行抗原-抗体反应。 当反应达到平衡后 ，将溶液移至包被有相同固相抗原的聚苯乙烯微板中 ，用常规间接法 ELISA 测定溶液中剩余的游离抗体量。利用测出的 OD 值直接计算出亲和常数。当所用抗原≥所用抗体量 10 倍时 ，计算中可对抗体量忽略不计 ，这时可以用公式 A0/(A0-A) =1+Kd/a 计算出亲和力。其中 A0为无抗原存在时抗体的 OD 值 ，A 为加入了质量摩尔浓度为 a 的抗原后的 OD 值 ，Kd 为抗体亲和力常数的倒数。 |
▸表面等离子共振法（ SPR ）：SPR 测定抗体亲和力是基于表面等离子共振技术建立的一种亲和力测定技术。只需按照仪器说明对进行操作 ，在加好样品后 ，便可以得到亲和力常数。相较于竞争 ELISA 法 ，SPR 法测定抗体亲和力有诸多优势 ，如可以实时监测反应的动态过程 ，实验结果重现性好、仪器记录的数据不能随意更改 ，减少了主观因素的影响、实验的重复性更好等。 |
