酵母是一种单细胞低等真核生物,培养条件普通,生长繁殖速度迅速,能够耐受较高的流体静压,用于表达基因工程产品时,可以大规模生产,有效降低了生产成本。
酵母蛋白表达系统主要基于酵母菌细胞,常用的是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤酵母(Pichia pastoris)。这两种酵母系统均以真核细胞为基础,具备对复杂蛋白的正确折叠和修饰能力。
酵母是一种单细胞低等真核生物,培养条件普通,生长繁殖速度迅速,能够耐受较高的流体静压,用于表达基因工程产品时,可以大规模生产,有效降低了生产成本。
酵母蛋白表达系统主要基于酵母菌细胞,常用的是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤酵母(Pichia pastoris)。这两种酵母系统均以真核细胞为基础,具备对复杂蛋白的正确折叠和修饰能力。
比大肠表达系统高
实现大规模生产
蛋白质研究和应用
大肠杆菌蛋白表达服务内容 | 客户需提供的信息 | 实验周期 | 交付产品 |
---|---|---|---|
▸表达载体构建 ▸▸密码子优化全基因合成 ▸▸PCR扩增产物酶切连接到pPic9k,pPic3.5k,pPiczαA等载体上 ▸▸转化TOP10宿主 ▸▸获得测序正确的重组质粒 ▸转化及菌株鉴定 ▸▸重组质粒大量制备 ▸▸线性化重组质粒 ▸▸电击转化 ▸▸阳性克隆子筛选(PCR法) ▸▸高拷贝菌株筛选(可选) ▸小试及放大表达纯化 ▸▸小试表达筛选 ▸▸定株,优化表达条件 ▸▸放大培养2-5升 ▸▸表达上清液浓缩 ▸▸通过亲和、离子交换、疏水及分子筛等多种层析方法纯化目的蛋白 PAGE分析纯化过程 ▸▸WB鉴定纯化后蛋白 | ▸表达体系系统选择(客户提供表达菌株的略过此步骤,仅提供表达质粒的可选择需要电转化的表达菌株) | ▸表达载体构建:3-4周 ▸转化及菌株鉴定:1-2周 ▸小试及放大表达纯化:3-4周 ▸整个服务流程需要:10-12周 | ▸基因合成报告 ▸测序验证报告 ▸包含表达质粒的大肠杆菌DH5a ▸表达质粒 ▸线性化检测图片 ▸阳性表达菌株 ▸PCR鉴定阳性菌株图 ▸高拷贝阳性菌株(可选) ▸小试表达流程报告 ▸小试表达总结 ▸蛋白纯化流程报告 ▸蛋白纯化原始图片 ▸发货蛋白 ▸Western Blot(标签抗体) |